Antistof mærkningsprocedurer

Antibody mærkningsprocedurer er teknikker, der anvendes i de biologiske videnskaber for at detektere tilstedeværelsen af ​​specifikke molekyler. Disse procedurer gør brug af forholdet mellem et antigen og antistof. Antigener kan være ethvert molekyle, som immunsystemet genkender. Et antistof er et Y -formet protein, der specifikt genkender et enkelt antigen . Biologer bruger bindende forholdet mellem et antistof og antigen for at bestemme placeringen af ​​et bestemt molekyle i en prøve. ELISA

ELISA eller enzymkoblet immunosorbent assay , er et biologisk laboratorium teknik, der anvendes til at påvise tilstedeværelsen af et antigen eller antistof . Det er ofte anvendes i medicinsk diagnose for at bestemme , om en patient har været udsat for en bestemt type infektion.

At udføre en ELISA prøven — indeholder antigenet af interesse — er forankret til en solid støtte i et fad . En opløsning med det komplementære antistof tilsættes til skålen, og antistoffet binder til antigenet. Overskydende antistof vaskes derefter væk, og efterlader kun de antigen-antistof - bundet par i skålen. Disse kan visualiseres ved tilsætning af et fluorescerende molekyle, der binder til antistof , og giver et visuelt signal , som derefter kan kvantificeres. På denne måde kan tilstedeværelsen og mængden af antigenet af interesse indirekte bestemmes.
Western Blot

Western blot er en anden form for teknik, der anvendes til at påvise et specifikt protein i en prøve og bestemme dens størrelse. Først prøveproteiner fordelt efter størrelse på en gel under anvendelse af gelelektroforese . På dette tidspunkt , proteiner er ikke synlige for det blotte øje. Forskere derefter overføre proteinerne til en membran , og der tilsættes en opløsning indeholdende antistof mod antigenet af interesse. Efter afvaskning af overskydende opløsning er antistoffet bundet til antigenet på membranen.

Tilføjelse af et sekundært antistof forårsager den oprindelige eller primære antistof til at udsende lys . Kvantificering af mængden af ​​lys, der udsendes giver forskerne at bestemme tilstedeværelsen af ​​antigenet , dens størrelse i forhold til andre proteiner og dets relative koncentration.
Immunohistokemi

Immunohistokemi er en teknik, der gør det muligt for forskerne at visualisere placeringen af ​​et protein i en vævsprøve . Små skiver af en prøve er forberedt og et primært antistof , som binder til antigenet af interesse , er tilføjet. Overskydende opløsning vaskes væk, før forskere tilføje et sekundært antistof . Dette antistof binder til det primære antistof -antigen- par, og udsender lys , signalering placeringen af ​​antigenet af interesse .

Forskere bruger et mikroskop for at visualisere , hvor antigenet er i cellen. Flere forskellige antistoffer , der er specifikke for et bestemt protein , kan anvendes til at bestemme den relative placering af en række forskellige molekyler i en celle. Hvis det er målet, der bruges forskellige farvede sekundære antistoffer til at skelne mellem de forskellige molekyler af interesse.
Flowcytometri

fluorescens-aktiveret celle sortering — eller FACS — er en type af flowcytometri anvendes til at adskille de forskellige typer af celler i en opløsning . Hver anden type celle er "tagged " med et antistof specifikt for denne celletype . Hver af disse antistoffer udsender en anden farve af lys. En maskine omrører opløsningen at bryde det i individuelle dråber og bruger en sensor til at detektere farven af ​​hver dråbe . Maskinen sorterer cellerne ved udsendte farve, opdele dem baseret på den type af protein de indeholder. FACS metodologi giver forskerne at sortere og kvantificere celler af interesse for deres forskning spørgsmål.
Immuno - Electron Microscopy

Normal elektronmikroskopi giver forskerne at undersøge strukturen af en celle forstørres op til 1 million gange . Immuno - elektronmikroskopi anvender egenskaberne af antistof-antigen- bindende at visualisere bestemte proteiner i meget tynde vævssnit . For det første er antistoffer med vedhæftede guldpartikler lov til at binde til antigenet af interesse. Et elektronmikroskop derefter visualiserer guldpartikler , der giver forskere et billede af , hvor proteinet er lokaliseret i cellen.

Selv immuno- elektronmikroskopi er enkelt i teorien , er det teknisk vanskeligt og meget dyrt at ansætte begrænse dens popularitet af brug i mange biologiske forskningsprogrammer.
hoteltilbud