Forskellen mellem direkte og indirekte ELISA

Et enzym -bundet immunosorbent assay (ELISA ) involverer omsætning af et antistof -enzym- kompleks med et antigen eller antistof holdes ubevægelig på en fast overflade . Ved inkubation af enzym med et passende substrat, et produkt dannet. Dannelsen af et produkt med til at detektere tilstedeværelsen af ​​antigenet eller antistoffet og dets mængde giver et mål for mængden af ​​antigen - antistof-reaktion , der forekom. ELISA-testen kan udføres i to former: direkte og indirekte . Test Format

I direkte ELISA-test , er et primært antistof afholdt på væggene af en mikrotiterplade. Når der tilsættes den prøve, der mistænkes for at indeholde det antigen , der er et antigen -antistof- reaktion. Dernæst er et enzym -bundet sekundært antistof , der er i stand til at reagere med antigenet tilsat. Hvis antigenet er til stede i prøven , bindes til dette enzym-bundet antistof. Når der tilsættes et farveløst substrat , hvis en farve udvikler sig, indikerer tilstedeværelsen af ​​antigen. I den indirekte ELISA , er antigen holdes på væggene i mikrotiterpladen . Når der tilføjes en prøve mistænkt for at indeholde antistoffer , opstår der en antigen-antistof- reaktion. Dernæst tilsættes et enzym -bundet sekundært antistof i stand til reaktion med den ubundne region af antistoffet. Når der tilsættes den farveløse substrat , det fører til udvikling af farve, hvis den anvendte prøve indeholder antistoffer .
Nem Testing

En bred vifte af mærkede sekundære antistoffer er kommercielt tilgængelige. Desuden er det muligt at skabe flere primære antistoffer i en given art og bruge den samme sekundære antistof til påvisning. Dette gør den indirekte ELISA let at udføre. I direkte ELISA de primære antistoffer være specielt forberedt til at reagere med det specifikke antigen, der mistænkes for at være til stede i prøven. Dette gør det direkte ELISA ufordelagtig i forhold til den indirekte test .
Hurtighed Testing

direkte ELISA-testen er hurtig i forhold til den indirekte test, fordi det anvender kun et enkelt antistof. Den indirekte ELISA kræver et ekstra trin af inkubation med et andet antistof under testproceduren , hvilket medfører en forsinkelse i at opnå resultater.
Følsomhed

direkte ELISA-testen er mindre følsom end indirekte form for testen, fordi det er langt mindre signalforstærkning . Desuden kan mærkningen af ​​det primære antistof med et enzym forringe dets immonoreactivity profil. I tilfælde af den indirekte ELISA , er det primære antistof ikke mærket , og derfor er det bevarer sin immunoreaktivitet . Desuden hver primære antistof har mange epitoper, som kan binde med det sekundære antistof , hvilket tillader forstærkning af signalet , forbedre metodens følsomhed. Men der er en chance for krydsreaktivitet mellem antigenet og det sekundære antistof , hvilket fører til fejl i resultaterne. Der er ingen sådan mulighed i den direkte ELISA-metoden .
Hoteltilbud