Protokol til transfektion af GFP

Brugen af ​​Green Fluorescent Protein revolutioneret molekylær-og cellebiologi , det gav forskerne at visualisere celler og proteiner på måder aldrig før muligt. Dens indvirkning på videnskabelig forskning var så dyb, at Osamu Shimomura i 2008 vandt Nobelprisen i kemi for sin opdagelse og isolering af GFP fra fluorescerende vandmænd. Definitioner

Et gen er sekvensen af ​​deoxyribonukleinsyre i celler, der er ansvarlig for produktionen af et specifikt protein . Et plasmid er et separat stykke af DNA, der indeholder et gen af interesse, såsom GFP. Transfektion er metoden til at indføre et plasmid i celler .
Metoder

Transfection involverer typisk blande en DNA- plasmid, der indeholder et gen, som GFP med lipider eller salte . Celler udsat for denne løsning , hvilket skaber huller i cellemembranen , således at plasmidet i cellen, hvor genet kan udtrykkes som protein. Kommercielle transfektionsreagenser kits er tilgængelige , eller reagenserne kan foretages i et laboratorium. Valget af transfektion metode afhænger af typen af ​​celler og plasmider , der anvendes . GFP visualiseres og overvåges med udstyr , der registrerer fluorescens.
Bruger

GFP er normalt knyttet til et protein af interesse for transfektion. Nobelkomiteen fremhævet sporing af "nerve celle skader under Alzheimers sygdom" og "hvordan insulinproducerende betaceller er skabt i bugspytkirtlen i et voksende foster " som eksempler.