Sådan Farv agarosegeler
Visualisering af nukleinsyren eller proteinet er afgørende for udførelsen af agarosegelelektroforese. Hvis du arbejder uden farvning af gelen , vil du ikke være i stand til at se , hvor prøven , du tester har nået , og derfor målinger af molekylær størrelse , for eksempel, vil blive stærkt begrænset. Farv din gel ved hjælp af et fælles , godt afprøvet farvestof , såsom ethidiumbromid ( EtBr ), der fluorescerer under ultraviolet lys (UV) , når indskudt i DNA- eller RNA- molekyler. Farvestoffet vil hjælpe dig med at udføre dit eksperiment ved at vise op molekylerne i din prøve som mørkeblå mærker. Ting du skalSafety handsker og beskyttelsesbriller
Agarosegel
Ethidiumbromid
Pipette ( Gilson for små mængder ) Loading buffer myHotelVideo.com: Vis mere Instruktioner
1
Bær handsker, der er tynd , men beskyttende , og lad dine fingre og hænder ubegrænset bevægelse. Brug en lille pipette til at drage nogle EtBr (eller tilsvarende plet ) ud af beholderen.
2
Tilføj 0,5 mikrogram per milliliter af dit valgte pletten til din prøve . Dæk prøven og bland manuelt. Adskillige shakes skulle være tilstrækkeligt.
3
Tilføj et negativt ladet loadingpufferen til mix ved hjælp af en pipette. Dette gør det muligt farvede prøve at blive set med det blotte øje, i naturligt lys og eliminerer behovet for dyre, skadelige UV , der ellers ville nedbryde molekylerne , som du er interesseret. Xylencyanol er et almindeligt anvendt loadingpufferen , men andre er tilgængelige . Sørg for at du vælger en loadingbuffer , der vil køre med samme hastighed som molekylet du måler . Xylencyanol kører med samme hastighed som DNA-fragmenter , der er 5000 basepar (bp) i længden.
4
Brug en ren pipette til at anvende din forbedrede prøve til brøndene ved starten af din agarosegel . Mængden du anvender , afhænger af størrelsen af gelkammene (godt tykkelse og længde og gel tykkelse) . Farv din prøve , og ikke kontrol , så du kan bestemme de parametre, du er interesseret i (f.eks molekylvægt ) korrekt og effektivt.
5
Alternativt kan udføre Southern blotting som en måde at visualisere din prøve . Overfør DNA til en nitrocellulosemembran . Udsættes for en hybridiseringsprobe . Dette er ikke farvning , som sådan, men giver et passende alternativ , som beskrevet af Access Excellence.
Hoteltilbud
Relaterede Sundhed Artikler